黃曲霉毒素是由黃曲霉菌和寄生曲霉產(chǎn)生的一類代謝產(chǎn)物,具有極強(qiáng)的毒性和致癌性,能引起多種動物發(fā)生癌變, 主要誘發(fā)肝癌。黃曲霉毒素廣泛存在于糧油食品中,其中以花生和玉米污染最為嚴(yán)重,一般以熱帶和亞熱帶地區(qū)的飼料污染較重。由于它的劇毒性、強(qiáng)致癌性及存在的廣泛性, 因此建立方便、 快速、 穩(wěn)定的檢測方法顯得尤為重要。

目前黃曲霉毒素檢測的國標(biāo)方法有薄層色譜法、酶聯(lián)免疫法、免疫親和柱凈化高效液相色譜法。薄層色譜法操作繁瑣、污染大、定量差、耗時長；而酶聯(lián)免疫法雖操作簡單、靈敏度高, 但特異性差；免疫親和柱高效液相色譜法是柱后衍生法, 它對于高黃曲霉毒素含量的樣品偏差較大,且柱后衍生不普及,給使用帶來不便。

賽智科技應(yīng)用檢測部采用自制凈化柱凈化，柱前衍生方法對黃曲霉毒素衍生化處理，利用全新高性能的LC-10Tvp高效液相色譜儀和Waters 2475 多通道熒光檢測器經(jīng)實踐檢測可提供飼料中黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1的同時測定的HPLC檢測方案，得出的結(jié)果準(zhǔn)確可靠，檢出限好，是一種很好的檢測黃曲霉毒素的方法，僅供廣大用戶參考。

以下是飼料中黃曲霉毒素的測定的詳細(xì)檢測方法。

• 1   儀器與試劑

• 1.1 儀器

• LC-10Tvp高效液相色譜儀

• Vertex 色譜柱　150mm×4.6mm×5μm

• Waters 2475 多通道熒光檢測器

• 自制凈化柱

• 2.1  試劑

• 甲醇，色譜純。

• 乙腈，色譜純。

• 三氟乙酸。

• 正己烷。

• 硅膠。

• 中性氧化鋁。

• 聚酰胺粉。

• 黃曲霉毒素標(biāo)準(zhǔn)樣品：純度≥99%。

• 2　  試樣溶液的制備

• 2.1  試樣的提取和凈化

• 使用粉碎機(jī)將飼料樣品研細(xì), 稱取研細(xì)樣品置于燒瓶或攪拌瓶中, 加入體積分?jǐn)?shù)為84%的乙腈溶液, 在旋轉(zhuǎn)震蕩器上震蕩。用漏斗、定性濾紙將其過濾到樣品瓶中, 將過濾液通過自制凈化柱凈化, 棄去前面的, 然后將凈化液轉(zhuǎn)移至潔凈的棕色瓶中, 在水浴60℃條件下用氮氣吹干。
  

• 2.2  柱前衍生條件
  

• 向氮氣吹干的剩余物中加入正己烷、三氟乙酸,立即旋緊蓋子。渦旋, 在40℃烘箱中衍生，室溫下氮氣吹干混合物, 用體積分?jǐn)?shù)為15%的乙腈溶液溶解殘余物并渦旋,以3000 r/ min的速度離心,把已經(jīng)制備凈化好的樣品液進(jìn)樣到液相色譜分析。

• 3    色譜條件

• 色譜柱：Vertex 色譜柱　150mm×4.6mm×5μm；

• 流動相：乙腈溶液；

• 檢測器：熒光檢測器，波長：λEx= 360 nm , λEm = 440 nm；

• 流速：1.0mL/min;

• 溫度：25℃；

• 進(jìn)樣量：20μL。

• 4 　液相色譜圖

• 利用上述液相色譜條件，5種黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1在10 min內(nèi)即可獲得很好的

• 在含有黃曲霉毒素B1的飼料樣品中添加5種黃曲霉毒素,利用自制凈化柱凈化, 然后進(jìn)樣分析。

• 參考文獻(xiàn)：

• [1] AOAC Of ficial Method 994. 08 , Aflat oxins in Corn, Almonds ,Brazil Nuts, Peanuts, and Pistach io Nuts[S] .

• [2] 劉洋, 陳枚.糧食與飼料工業(yè)，2010.

• [3] 何暉, 張琳. 高效液相色譜法測定飼料中的黃曲霉毒素. 福建畜牧獸醫(yī),2009,31(2):23-24.