近日，國家食藥總局發(fā)布《食用油脂中辣椒素的測定》食品補充檢驗方法。本方法規(guī)定了食用油脂中辣椒素（天然辣椒素、合成辣椒素、二氫辣椒素）含量的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定方法。適用于食用油脂中辣椒素（天然辣椒素、合成辣椒素、二氫辣椒素）含量的測定。

【原理】

試樣經(jīng)二氯甲烷溶解，氫氧化鈉水溶液提取酸化后，過固相萃取柱凈化，采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀檢測，外標法定量。

【試劑材料】

水為GB/T 6682規(guī)定的一級水。

乙腈（CH3CN）：色譜純。

甲醇（CH3OH）：色譜純。

甲酸（CH2O2）：質(zhì)譜級。

二氯甲烷（CH2Cl2）：色譜純。

氫氧化鈉（NaOH）：分析純。

濃硫酸（H2SO4）：98%，分析純。

【標準溶液】

標準儲備液：分別稱取天然辣椒素、合成辣椒素、二氫辣椒素標準品0.1 g（精確至0.000 1 g），用甲醇溶解，并轉(zhuǎn)移至100 mL容量瓶中，定容至刻度，標準儲備液濃度為1 mg/mL。貯存于4 ℃冰箱中，有效期3個月。

混合標準系列工作液：分別準確吸取標準儲備液適量于容量瓶中，用甲醇將其稀釋成含量分別為0.1 ng/mL、0.2 ng/mL、0.5 ng/mL、1 ng/mL、5 ng/mL、10 ng/mL、50 ng/mL和100 ng/mL的標準系列混合工作液。臨用時配制。

【儀器和設(shè)備】

LC-10Tvp高效液相色譜-島津LCMS-2010液質(zhì)聯(lián)用儀：配有電噴霧離子源。

C18 固相萃取（SPE）小柱：1000 mg，6 mL，或等效SPE柱。

超聲波清洗器。

分析天平：感量為0.000 1 g。

離心機：轉(zhuǎn)速≥4000 r/min。

渦旋混合器。

【試樣制備】

準確稱取1 g（精確至0.000 1 g）樣品于10 mL具塞塑料試管中，加入1 mL二氯甲烷，再加入3 mL 2%氫氧化鈉溶液，渦旋提取10 min，4000 r/min離心10 min，取上層水相；殘留有機相再用3 mL 2%氫氧化鈉溶液重復(fù)提取一次，合并水相，再用稀硫酸溶液調(diào)節(jié)pH至2-3之間后進行固相萃取操作。C18 SPE小柱預(yù)先用3 mL乙腈淋洗3次，再用3 mL純水淋洗2次進行活化，然后將調(diào)節(jié)完pH值的水相提取液加入小柱，控制流速至每秒1-2滴，待全部溶液通過SPE小柱后，以3 mL超純水淋洗2次，棄去流出液，最終以3 mL乙腈洗脫2次。乙腈洗脫液50℃氮吹近干，用0.5 mL甲醇溶解后過微孔濾膜（0.22 μm，有機相），過濾液置于進樣小瓶內(nèi)襯管中供LC-MS/MS測定。

【色譜條件】

色譜柱：C18柱，1.8 μm，100 mm×2.1 mm（內(nèi)徑），或性能相當者；

流動相：A為0.1%甲酸水溶液（3.2.1），B為0.1%甲酸乙腈溶液（3.2.2）

流速：0.3 mL/min；

柱溫：40 ℃；

進樣量：2 μL。

洗脫梯度：

【質(zhì)譜條件】

電離方式：電噴霧正離子模式；

b）檢測方式：多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）；

c）霧化氣壓力：30 psi；

d）離子噴霧電壓：4000 V；

e）干燥氣溫度：500 ℃；

f）干燥氣流速：8 L/min；

g）定性離子、定量離子、碎裂電壓和碰撞能量。

【定性測定】

按照上述條件測定試樣和混合標準工作液，如果試樣中的質(zhì)量色譜峰保留時間與混合標準工作液中的某種組分一致（變化范圍在±2.5%之內(nèi)）；且試樣中定性離子的相對豐度與濃度相當混合標準工作液的定性離子相對豐度相比，相對豐度（k）偏差不超過表3規(guī)定的范圍，則可判定為試樣中存在該組分。

【定量測定】

將混合標準系列工作液分別按儀器參考條件進行測定，得到相應(yīng)的標準溶液的色譜峰面積。以混合標準工作液的濃度為橫坐標，以色譜峰的峰面積為縱坐標，繪制標準曲線。

圖B.1 合成辣椒素MRM色譜圖  圖B.2 天然辣椒素MRM色譜圖  圖B.3 二氫辣椒素MRM色譜圖

【試樣溶液測定】

將試樣溶液按儀器參考條件進行測定，得到相應(yīng)的樣品溶液的色譜峰面積。根據(jù)標準曲線得到待測液中組分的濃度，平行測定次數(shù)不少于兩次；樣品中各待測組分的響應(yīng)值應(yīng)在標準曲線的線性響應(yīng)范圍內(nèi)，若超出標準曲線線性范圍，應(yīng)用甲醇稀釋后進行分析。

【結(jié)果】

此方法的檢出限為：合成辣椒素0.05 μg/kg；天然辣椒素0.03 μg/kg；二氫辣椒素0.02 μg/kg。

此方法的定量限為：合成辣椒素0.2 μg/kg；天然辣椒素0.1 μg/kg；二氫辣椒素0.1 μg/kg。

本方法所測定的樣品中辣椒素（合成辣椒素、天然辣椒素和二氫辣椒素）總含量大于或等于1.0 μg/kg時，該油脂樣品可能存在異常, 提示存在使用餐廚回收油脂的可能。